英文题目:Holo-omics for deciphering plant-microbiome interactions
中文题目:解读植物-微生物相互作用的全息组学
期刊名:Microbiome
影响因子:11.607
发表时间:2021-3-24
宿主-微生物相互作用因其对宿主健康的重要性而得到认可。对宿主-微生物群落关系的分子基础的进一步理解将提高研究者准确预测宿主适应性和处理相互作用结果的能力。在植物微生物研究领域,解开植物与其微生物伙伴之间的功能关系是有效利用微生物提高植物适应性的新方向。研究者提出将宿主和微生物数据集匹配的多组学策略,这里称为全息组学(holo-omics),为这一领域的假设发展和进步提供了一种强有力的方法。研究者讨论了几个实验设计考虑因素,并列举了一个研究案例,以强调全息组学在植物微生物系统中产生更全面的分子网络观点的潜力。此外,研究者讨论了进行全息组学研究的最大挑战。具体包括缺乏经过审查的分析框架和公开可用的工具,以及集成不同数据所需的技术专业知识等。最后,研究者总结了全息组学研究的适当案例,下游验证的需要,以及为植物微生物研究领域带来希望的新实验技术。研究者认为,利用全息组学方法来表征宿主-微生物的相互作用,可以为拓宽系统水平的理解提供重要的机会,并为改善宿主健康和适应性的微生物方法提供重要的信息。
宿主微生物已经成为宿主健康的重要决定因素,也是宿主与其非生物环境相互作用的重要调节因子。事实上,微生物群落中的微生物基因增加了宿主自身的基因库,可以提高宿主对环境干扰的适应能力,或者在某些情况下,阻止宿主这样做。在人类中,越来越多的人认识到微生物可以影响多种病理,包括癌症、心脏代谢疾病、过敏和肥胖。同样,现在人们认识到,植物的适应性很大程度上取决于与植物微生物群落的相互作用,这不仅包括对疾病的易感性,还包括在生物和非生物胁迫下的生存能力。最近的研究表明,这些相互作用依赖于复杂的分子交换,包括宿主对其微生物伙伴的感知,微生物对宿主的感知,以及围绕对两者生存都很重要的营养。此外,新的发现表明,宿主适应性的最终结果不仅取决于宿主和微生物之间的物质交换,还取决于微生物本身成员之间的信号和代谢相互作用。总的来说,这些研究表明,理解植物微生物群落可能需要在宿主和微生物的功能、活性和分子交换水平上检测这些关系。
目前,研究者缺乏对植物微生物群落相互作用的必要的功能洞察,这是由于系统的复杂性导致的。与动物肠道不同,植物微生物群是由地球上最多样的周围环境之一的土壤而组成的,并存在于其中。土壤中有一个巨大的微生物生态系统,包括细菌、病毒、真菌、古细菌和原生生物,它们在复杂的营养交换网络中相互作用。这些土壤微生物群的丰度、组成和活性会在短物理距离、短时间内发生剧烈变化,并对季节性环境因素做出反应,从而增加植物提取微生物群落的来源多样性。作为复杂性的一个附加层,存在于植物中并由植物分泌的代谢物为微生物群提供营养,并且这些代谢物在植物发育过程中,以及从组织到组织的组成和数量会发生显著变化,导致微生物类群在时间和空间上的不同。此外,已知特定的微生物谱系会引发特定植物代谢物的系统性渗出,这可能会在微生物组发育中形成反馈调节。总的来说,这些因素产生了一个动态的、相互关联的生物系统,挑战了研究者破译和维持它的基本分子机制的能力。
全息组学研究的实验设计
图1、全息组学实验的设计、分析和验证的考虑。在左边,与设计相关的考虑因素包括纵向设计方法,样本类型的适当选择,以及对研究中提出的科学问题的最佳数据类型的评估。在中间,与分析相关的挑战包括选择适当范围的生物和技术专业知识,以及选择适当的分析框架和工具来直接整合不同的数据类型。对下游假设检验和验证技术的建议包括使用宿主遗传空间的直接和进化驱动的修改,微生物遗传学的直接操作,以及自下而上构建复杂性降低的合成群落。
其次,在设计一个综合的全息组学研究时,考虑样本和取样过程的限制是至关重要的。例如,必须仔细考虑每种收集的样本类型对于特定所需数据类型的适用性,在某些情况下,可能需要更改采样策略才能变得可行。例如,叶片微生物组样品中来自植物的DNA、RNA和蛋白质的含量将比来自微生物的呈指数增长,因此如果不去除植物来源的污染物,一些微生物技术可能是不可行的。对于微生物生物量低的环境,如干旱胁迫下的沙土,必须收集大量样品进行核酸提取。另一方面,腐殖酸含量高的土壤或根际样品可能需要特殊试剂来去除腐殖酸(~我们天昊生物的独门秘技Accu16STM细菌绝对定量测序技术完美解决了腐殖酸等PCR抑制物对样品细菌16S拷贝数定量的干扰问题,请点击“专属含PCR抑制剂的环境样本微生物拷贝数定量的最佳解决方案!”了解详情~)。此外,不同的植物组织,如根和叶,可能需要不同的收集方法或需要不同的时间来收集,这些差异可能会无意中影响样品的优劣和数据结果,特别是对时间和温度高度敏感的组学策略。当单个收集的样本将用于产生多种数据类型时,重要的是要确定一个对所有数据类型都有效的通用采样策略。最后,样本数据的详细收集和报告对于更好地确保结果的可再现性和生物学相关性非常重要。
第三,重要的是不仅要考虑预期的数据类型如何影响采样需求,还要考虑在全息组学设计中用特定的数据类型解决什么问题最好,以及实际上是否有利。虽然在这一框架内确实可以提出许多问题,但需要仔细审查哪些数据类型组合最适合正在研究的系统并可实现、所进行的调查范围以及项目可用的资源;这包括可用的工具、数据库和计算资源,宿主基因组注释的范围和质量,以及生物和非生物参数对数据获取的潜在影响。例如,与其他宿主生物相比,全基因组学在非模式植物中可能特别具有挑战性,因为基因组庞大,注释不足,代谢多样性大,细胞器多,与共生体和病原体的相互作用网络复杂。在某些情况下,这可能会排除在宿主包含一些有用的数据类型,如转录组学或表观组学。
植物全息组学研究案例
作为植物微生物群全息组学研究的最新实例,Xu等(PNAS, 2018;115:E4284–93)进行了高粱及其相关根微生物群对干旱胁迫响应的大规模田间研究。这项工作是在加州中部山谷进行的,那里夏季缺少降雨和高温实际上保证了高粱生长周期中诱导干旱条件的能力,而不需要避雨棚。由于植物对干旱的反应因其发育阶段的不同而不同,在这次干旱实验中收集的时间序列数据被用来得出高粱对不同生长阶段水分胁迫反应的更完整的观点。这种方法对于探索植物微生物群也有价值;据研究者所知,在田间对作物系统进行的纵向微生物群研究很少,而植物微生物群落的多样性、组成和功能随植物生长和发育而变化的研究就更少了。
作为这项研究的一部分,两种高粱基因型(RTx430和BTx642)在加利福尼亚州帕利尔的科尔尼农业研究和推广中心的农田中随机分组种植。从出苗后的第2周到第8周,对单个随机区组进行干旱胁迫或正常灌溉,此时再次给干旱胁迫的样品浇水,以探索重新灌溉对宿主和微生物过程的影响。以纵向方式(每周在一天的特定时间一次)从叶和根组织以及根际和大块土壤中收集样本。该设计允许调查受样品室(叶、根、根际和土壤)、基因型(RTx430和BTx642)、浇水处理(灌溉和干旱)和植物发育(从幼苗出现到籽粒成熟)影响的差异。更重要的是,所描述的全息组学方法能够在不同的数据集上探索微生物和植物表型之间的联系。
首先,研究了干旱对根细菌微生物群落组成的影响。扩增子测序(16S rRNA)显示高粱根系中的细菌群落以发育条件的方式对早期干旱胁迫做出强烈反应。特别是,观察到干旱延迟了根和根际微生物群的正常发育,这种发育在复水后迅速恢复。值得注意的是,干旱胁迫导致革兰氏阳性菌的大量富集,包括放线菌和厚壁菌门,以及含氯菌门。第二,对微生物组转录活性的探索被用来寻找微生物方面这种广泛但明确的谱系特异性富集的潜在原因。来自根际的翻译数据揭示了与碳水化合物、氨基酸和次生代谢物的运输和分解代谢相关的微生物过程中强烈的干旱诱导的转变,已知其中许多存在于植物产生的根分泌物中,这些根分泌物滋养根际和根相关微生物。通过纳入来自宿主根组织的代谢组学数据,研究者确定了干旱期间宿主产生的富含干旱的根代谢物和根微生物组中上调的微生物转运途径之间的强烈重叠。通过qPCR和RNA-Seq对参与这些代谢途径的几个高粱基因的转录水平进行的分析显示了强烈的上调,表明富集的代谢物可能是由宿主而不是微生物本身产生的。最后,基因组解析宏基因组学允许为根际微生物组中许多富集和衰竭的分类群开发部分完整的基因组库。这些群体之间的比较基因组学方法表明,在干旱胁迫下高度富集的微生物具有明显更多的基因,这些基因被分配用于运输和分解许多富含干旱的根代谢物。基于对这些单个数据集的综合分析,研究者提出了一个假设,即干旱通过宿主分泌物谱的变化导致根微生物群中特定微生物的富集,这种变化有利于这些分类群因底物偏好而生长。
植物生物学领域的全息组学研究
图2、连接植物和微生物组学技术。全息组学研究的植物微生物研究领域的最新实例,采用了来自宿主数据类型(绿色)和相关微生物数据类型(蓝色)的配对数据集。
目前,最常包含的宿主数据类型是转录组学,它提供了一个关于宿主功能的广泛的,并且在许多情况下是相对良好注释的视角。这种数据类型的一个明显优势是,就分析而言,它可能是所有植物组学技术中发展最完善的;有相对大量的可用的工具,以及一系列用于下游分析的植物-宿主特异性表达图谱。作为一个在全息组学框架中成功应用宿主转录组学的研究实例,Castrillo等人探索了拟南芥中磷酸盐饥饿反应(PSR)与微生物组组成和功能之间的关系。作为这种设计的结果,研究人员发现,植物免疫系统在微生物组组装过程中协调微生物识别和营养线索;16S rRNA组成图谱表明,PSR突变体的微生物群不同于野生型拟南芥。此外,研究表明,在有限的磷酸盐条件下,合成群落接种增强了PSR主调节因子(PHR1)的活性,这证实PHR1直接调节一组功能相关的植物-微生物识别基因。拟南芥根的全基因组基因表达分析表明,拟南芥中的PHR1突变体也通过改变茉莉酸和水杨酸生物合成途径中的基因表达直接抑制植物免疫系统。综上所述,这一整体设计表明植物根微生物群直接连接磷酸盐胁迫反应和植物免疫系统。
代谢物代表基因、转录物和蛋白质之间多重相互作用的下游产物,并作为宿主-微生物相互作用功能界面的重要组成部分。将代谢组学数据纳入全息组学研究的优势在于,代谢组学研究所必需的许多实验、分析和数据整合要求实际上与基因组学、转录组学和蛋白质组学研究完全兼容。为此,有人提出代谢组学可以为许多全息组学实验的设计和分析提供一个“共同标准”。例如,通过结合微生物组分析、初级代谢物定量、宿主防御基因表达、食草动物生长分析和微生物互补分析,胡等人发现,苯并噁唑类物质(BXs)是一类由小麦和玉米等谷物根部释放的防御性次级代谢物,可与土壤微生物群落形成反馈回路,从而改变未来几代作物的表现。代谢组学用于识别和量化特定植物在进入土壤时产生的BX分类,在几个实验设计中的扩增子分析显示,这些化合物的渗出改变了宿主及其后代的根相关真菌和细菌群落,甚至在越冬期之后也是如此。最后,宿主现象学和宿主基因表达分析表明,土壤微生物群落的这些条件性变化导致了下一代宿主防御的改变,包括已知调节食草动物的植物激素水平的改变。该系统中的另一项研究证实了BXs作为根内膜守门人的作用,允许特定的微生物谱系进入宿主。尽管使用代谢组学数据进行全基因组研究有许多优势,但仍存在一些挑战,即许多峰不能被识别为特定的代谢物,并且由于数据中的噪声,研究通常需要更大的复制。此外,可识别代谢物的数量远比基因组或转录组层的可识别基因和转录本更有限,因此代谢组学数据的使用可能会限制“搜索空间”,从而限制最终结果的解释。
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