基于毛细管电泳的中国汉族人群苯丙氨酸羟化酶基因的热点突变检测方法

高苯丙氨酸血症患儿症状

       近日，由南京妇幼保健院发表的名为A capillary electrophoresis-based variant hotspot genotyping method for rapid and reliable analysis of the phenylalanine hydroxylase gene in the Chinese Han population （基于毛细管电泳技术的中国汉族人群苯丙氨酸羟化酶基因的变异热点分型方法）一文中[1]，就是采用的SNaPshot的方法来进行PAH基因检测的。该研究同时采用二代测序和具备检测96个HPA热点突变的SNaPshot方法分析18例中国HPA患者，研究中NGS共成功鉴定出了36个PAH基因突变，而SNaPshot则在这群患者中鉴定出了33个突变。SNaPshot在3个患者中只发现了一个突变位点。之后，采用Sanger测序对PAH基因的13个外显子进行了直接测序，发现了这3个患者的另一个杂合突变。漏检的这3个突变，在SNaPshot这个PAH的检测体系中没有包括。其中c.734T>C, c.1220C>T这两个位点以前在中国人群中没有报道过。因此，SNaPshot的这个体系，对突变的检出率为(33/36) 91.6%。

       随后该研究使用SNaPshot的这个检测体系对中国东部地区的4276人进行HPA突变谱系的检测，共检出了27个不同的突变类型。在这些人群中PAH基因突变的携带率约为1/58 (1.73%)，其中c.728G > A是最常见的突变。

       该研究中采用的PAH 96个热点突变的SNaPshot检测体系，是由南京妇幼保健院与我司天昊生物医药科技（苏州）有限公司共同开发，通过该研究中大规模人群的应用，证实该检测体系选取的热点突变具有人群覆盖度高的特点（目前PAH在数据库中报道的中国人群中的热点突变，该体系几乎都覆盖）。在本次研究中，漏检的2个位点是在中国人群中首次报道的突变，这类数据库中没有收录的突变即使采用NGS的方法也无法检出。所以，SNaPshot的筛查效率几乎可与NGS相媲美，但检测速度更快（仅需3天），价格更低。因此，无论是临床上疑似PAH的病人初筛还是大规模普通人群的普筛，都不失为一种有效的筛查手段。

       目前，PAH的基因检测国内还没有有证的试剂盒，而我司不仅有单项的PAH检测体系，更有携带者筛查的组合体系（15种国人高发遗传病携带者筛查），可满足临床不同的需求。PAH由于地域性的差异，国内各地区的发病率并不相同。我国的PAH总体发病率约为1/11614 [2]，但北方高于南方。如甘肃发病率为1/3420，甘肃省的7个市（州）兰州市、白银市、武威市、酒泉市、定西市、临夏州和甘南州的发病率为1/2268~1/4415之间，与同属西北地区的宁夏[3]（宁夏PAH的发病率约为1/3030）、新疆[4]（新疆地区发病率约为1/2366）发病率相近，内蒙古（发病率为1/1942）的发病率更高。辽宁省[5]（发病率1/6403）,黑龙江[6]（发病率1/7841）的发病率也明显高于我国南方的一些地区，如广州[7]（发病率为1/30606），福建[8]（发病率为1/32850），湖南[9]（发病率为1/33694）。符合我国PKU发病率北方人群高于南方人群的特点。因此，在全国，尤其是我国北部地区开展PAH的普通人群筛查尤为重要。这是减少PAH患儿出生，提高出生人口质量的有效方法。

参考文献：

[1]. Binbin. Shao, An Liu, Jingjing Zhang et al., A capillary electrophoresis-based variant hotspot genotyping method for rapid and reliable analysis of the phenylalanine hydroxylase gene in the Chinese Han population. Clinca Chimica Acta

[2]. 国娟、刘奇杰、王书平，等. 宁夏2007-2010 年新生儿先天性甲状腺功能减低症和苯丙酮尿症筛查情况分析[J].中国新生儿科杂志，2011,32（9）：409-410

[3]. 李之光、薛淑媛，马光娟，等. 新疆地区40216例新生儿苯丙酮尿症筛查结果分析[J]. 中国优生与遗传杂志，2011,19（5）：84-85

[4]. 李小洪、邓奎、王艳萍，等. 中国大陆地区苯丙酮尿症发生率的空间聚集性分析[J].中国优生与遗传杂志， 2014年第9期

[5]. 穆雪、霍晶、马海玲，等. 新生儿苯丙酮尿症筛查十年结果分析[J]. 中国临床医师杂志，2011年，第5卷第6期

[6]. 李蓓、江剑辉、曹伟锋，等. 广州市1071203例新生儿苯丙酮尿症筛查结果回顾性分析[J]. 中国妇幼保健，2011,26（6）

[7]. 朱文斌、王振南、陈涵强，等. 福建省新生儿苯丙酮尿症筛查状况分析[J]. 海霞预防医学杂志，2020年第4期

[8].鄢慧明、唐华、胡浩，等.2001~2011年湖南省新生儿苯丙酮尿症（PKU）筛查结果分析与体会. 第五届全国新生儿疾病筛查技术与管理新进展学术研讨会